产品货号：
JN5065
中文名称：
2×Pfu MasterMix(含染料)
英文名称：
2×Pfu PCR Master Mix(Quick Load)
产品规格：
1mL|5mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu MasterMix(含染料)专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，且含上样染料，PCR反应后可直接电泳，非常方便。
用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
- 高保真：Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
- 灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
- 快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。
- 便利：含上样染料，PCR反应后可直接电泳。
| 组分 | 1mL | 5mL |
| 2×Pfu MasterMix(含染料) | 1mL | 5×1mL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃
经检测无外源核酸酶残留，qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端，无3′端"A"突出，除使用BalbRec PCR一步定向克隆试剂盒（Cat.No:NR005）外，其它PCR产物的克隆方案有：
- PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。
- 将产物3′末端加A后再与T载体连接。
- 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20～30mers。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。
- 需要溶解完全后使用，防止离子浓度不均匀。
- 应根据实验目的选择合适的循环数，循环数过少，会造成扩增量不足。循环数过多，扩增量增加，但突变率会增加，并造成非特异性扩增。
- 根据引物Tm值设置合适的退火温度，退火温度过低，会造成非特性扩增。退火温度过高，可能扩增不到目的条带。
- 常用反应体系
注：Mg2+终浓度为2mM。成分 用量 2×Pfu MasterMix(含染料) 25μL 上游引物 0.2～1.0μM（终浓度） 下游引物 0.2～1.0μM（终浓度） 模板 1～50ng（质粒）
10ng～1μg（基因组）ddH2O 至50μL - 常用PCR反应程序
- 当扩增片段＜3K：
反应阶段 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 90s 1 变性 94℃ 20s 30 退火 50～60℃ 20s 延伸 72℃ 1kb/60s 终延伸 72℃ 5min 1 保温 4℃ - 1 - 当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp)：
反应阶段 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 5min 1 变性 94℃ 5s 30 退火/延伸 68℃ 1kb/60s 终延伸 72℃ 5min 1 保温 4℃ - 1
- 当扩增片段＜3K：
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